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이 름
  최종호 2010-03-30 12:02:40, Hit : 10915
파일 #1   Confocal_사용법.zip (3.69 MB)   Download : 452
파일 #2   Confocal_사용법_최종호_20100330.txt (4.0 KB)   Download : 426
제 목   Confocal Microscope 사용법
Operation of confocal microscope

모델: LSM 510meta / Karl Zeiss / Germany
위치: anti-aging center 6층 SPF 동물실험실 내 현미경실

준비
        1. 사전예약
        2. 전사용자가 있는가 확인하여, 30분 이내에 사용자가 있을시 광원을 끄지 않을 것을 부탁함.
        3. sample slide. invert slide 방식이므로 cover slide가 단단히 붙어있어야 함.
        5. 미리 촬영할 부분을 형광현미경으로 찾은 후, slide에 해당 위치를 표시해 놓음.
        4. USB 준비

비고: 시간당 사용요금 있음

Procedure
1. 전원을 끈 후에는 30분 냉각되어 있어야 합니다. 전원을 켠 후에는 15분 예열되어야 합니다.
2. 장비에 붙어있는 번호를 따라서 전원을 켭니다. 1 > (2번 스위치는 고장으로 생략) > 3 > 4 > 6
3. 컴퓨터를 가동합니다. 암호는 관리자에게 문의함.
4. 바탕화면에 이미지 변환 프로그램의 설치파일이 있습니다. 가져와서 개인 컴퓨터에 설치하시기 바람.

5. LSM 510meta 프로그램 가동.
6. scan new image가 눌러져 있도록 하고, start expert mode를 클릭합니다.
7. 상위메뉴은 file / acquire / .... 로 되어 있습니다.
8. file 메뉴에서 새로운 작업 폴더를 설정하고 나중에 해당폴더를 복사해 가져옵니다.
9. 기존의 파일을 열 경우에는 reuse 버튼을 이용하여 셋팅을 그대로 가져올 수가 있습니다.

10. acquire 메뉴로 들어가서 laser / Micro / Config / Scan 의 메뉴를 순서대로 사용하게 됩니다.

11. 먼저 사용할 레이져를 켭니다.
12. argon은 stanby를 누른 후 5분정도 지나야 on을 누를 수 있습니다. output은 50까지 조정합니다.
13. 다른 레이져는 바로 on을 누르며, stanby가 있으면 stanby를 누를 경우 바로 on이 됩니다.
14. 우리가 사용하는 레이져는 파장이 488, 543, 633 정도 입니다.

15. micro로 들어가서 사용할 렌즈를 설정합니다.
16. 현미경을 육안으로 보기 위해서는 메인 패널에 vis라고 된 부분이 눌러져 있어야 합니다.
17. 40x ( 종합 400x)를 설정합니다. 렌즈 돌아가는 소리가 들림
18. 현미경을 상체를 뒤로 젖힙니다.
19. 렌즈 위에 증류수를 한방울 뿌리고 slide를 뒤집어서 올린 후 현미경 상체를 원위치 시킵니다.
20. 형광은 GFP / UV / Rho 를 눌러서 대상을 찾습니다.
21. 형광은 사용하고 바로 꺼야 염색이 보존됩니다. 현미경 우층하단에도 형광 on/off 스위치가 있음.

22. 대상을 찾은 후 vis 대신 lsm을 누릅니다. scan시 자동으로 변환되기도 함.
23. config로 들어갑니다.
24. channel mode에서 multi-track을 선택하고, config 버튼을 눌러서 원하는 파장의 조합을 고릅니다.
25. excitation 버튼을 누르면 각각의 광원의 강도를 조절할 수 있습니다.

26. scan으로 들어갑니다.
27. mode 패널이 보입니다.
28. frame에서 size=512 / depth=12bit / direction=양쪽 / mode=line / method=mean / number=1
29. 기본 설정은 바탕화면에 저장된 그림을 참고함.
30. channel 패널로 들어갑니다.
31. pinhole을 설정하는데, 오른쪽의 1버튼을 누르면 최적화됩니다.
32. 채널별로 최적화된 pinhole 중 큰쪽으로 동조시킵니다.
33. 밑의 detection gain등은 영상결과를 보고 조절합니다.

34. 오른쪽의 find를 누르면 영상이 생깁니다.
35. fastxy를 누르면 빠르게 스캔을 시행합니다.
36. stop을 누르면 마지막 영상에서 고정됩니다.

37. 영상의 오른쪽에는 새로운 매뉴 패널이 생겼습니다.
38. pallete는 range indicator 모드를 이용해서 saturation된 부분을 보여줍니다.
39. fastxy모드에서 광원과 detection 세기를 조절하여 pallete의 빨간색과 파란생을 최소화 시킵니다.
40. crop은 해당 면적을 잘라내어 다시 512x512 면적으로 재구성하는 dizital zoom 입니다.
41. 원하는 이미지가 나오면 scan-mode-scan average 패널에서 number를 4정도로 바꾸어 노이지를 줄입니다.
42. save로 이미지 정보를 저장합니다.

43. z-stack은 일정한 간격으로 초점을 조절하여 3차원 영상을 구현하게 해 줍니다.
44. z-setting으로 들어갑니다.
45. 스캔을 원하는 깊이의 처음과 끝을 mark firt와 mark last로 설정합니다. 순서는 상관없음.
46. 상단에 z-slice를 누르면 최적의 slice 개수가 지정됩니다.
47. 오른쪽 패널의 start를 누르면 자동으로 단층이미지가 만들어집니다.
48. 그림 메뉴에서 slice버튼을 누르고 게이지를 이용해서 각각의 단층이미지를 확인합니다.
49. 동영상은 series 모드로 저장가능합니다.

50. 이제 장비 사용을 종료합니다.
51. 다음 사용자가 있는지 확인한 후 전원을 끌지 결정합니다.
52. 레이져 소스를 stanby로 변환합니다.  1분 후에 off를 누름
53. 레이져 output을 최저로 되돌림.
54. 프로그램 종료.
55. 5분후 레이져의 팬이 조용해지면 시작의 역순으로 전원을 끕니다. 6>4>3>1
56. 장비 왼쪽 뒤의 에어콘 물받이의 물을 제거합니다.
57. 로그북을 작성하고 퇴실.

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임기환
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윤지현
  2010/03/11 

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